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热启动Bst dU5.0 DNA聚合酶系列

—————HaiGene创新酶，全球首款100%dUTP使用能力的LAMP用酶!
LAMP技术学习资料
产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3861-00 热启动Bst dU5.0 DNA聚合酶(16U/μl)(无甘油) 1600U 750
16KU 5,000
A3861-20 5xBst dU5.0 LAMP基础预混液
(100%dUTP、不含甘油、不含热敏UDG酶)		 100Tx20μl 1,000
500Tx20μl 4,000
A3861-21 5xBst dU5.0 LAMP荧光预混液
(100%dUTP、不含甘油、不含热敏UDG酶)		 100Tx20μl 1,000
500Tx20μl 4,000
A3861-22 基础Bst dU5.0 LAMP冻干瓶
(100%dUTP、不含热敏UDG酶)		 100Tx20μl 1,000
500Tx20μl 4,000
A3861-23 荧光Bst dU5.0 LAMP冻干瓶
(100%dUTP、不含热敏UDG酶)		 100Tx20μl 1,000
500Tx20μl 4,000
A3861-24 基础Bst dU5.0 LAMP冻干球（with UDG）
(100%dUTP、含热敏UDG酶))		 100Tx20μl 1,250
500Tx20μl 5,000
A3861-25 荧光Bst dU5.0 LAMP冻干球(with UDG)
(100%dUTP、含热敏UDG酶)		 96Tx20μl 1,250
480Tx20μl 5,000
冻干球的订制服务：单球反应体积20-100μl
用于LAMP扩增的其它辅助品
A3828-21 OG 橙绿变色管 96T(25 μl体系) 750
A3831-57 LAMP Loop DP-Probe (订制品) 1000Tx25 μl 1,500
         HaiGene Bst dU5.0 DNA聚合酶是HaiGene于2025年底推出的创新型Bst DNA聚合酶。该酶融合了Bst2.0(dUTP渗入能力)、Bst3.0(快速扩增、抗杂质)、Bst4.2（70℃高温反应）优势于一身，与高性能的Bst XT等聚合酶相比，该酶还可完全使用dUTP(100%)来代替反应体系中的dTTP。100%dUTP的使用能力，对于LAMP的防污染至关重要。此外，该酶不仅通用于DNA或RNA的LAMP扩增，而且全系产品均为热启动版本。
性能特点：（1）Bst dU5.0 DNA聚合酶包含热启动Aptamer，其确保在<30℃时，酶活封闭效率>90%,在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；（2）在65-70℃条件下，均可有效进行LAMP扩增；（3）相比于Bst2.0 dUTP的使用比例仅50%（这无法满足LAMP的防污染要求），Bst dU5.0无需使用dTTP，可完全替换成dUTP，速度几乎无下降。在配合热敏UDG的条件下，可有效的防止气溶胶引起的污染。
  Bst2.0
(A3801)		 >Bst3.0
(A3901)		 Bst4.0
(A3805)		 热启动Bst4.2
(A3831-00)		 热启动Bst dU5.0
(A3861-00)
热启动功能 否 否 否 是 是
酶储存液 50%甘油 50%甘油 50%甘油 无甘油 无甘油
反应温度 65℃ 65℃ 65℃ 70℃ 65~70℃
检测底物 DNA DNA DNA/RNA DNA/RNA DNA/RNA
dUTP使用能力 50% 50% 50% 50% 100%
扩增速度 ★★★ ★★★★★ ★★★★★ ★★★★★ ★★★★
LAMP Mix供货 不提供 不提供 不提供 A3831-20基础预混液(dNTP)
A3831-21荧光预混液(dNTP)
A3831-22变色预混液(dNTP)		 A3861-20基础预混液(全dUTP)
A3861-21荧光预混液(全dUTP)
LAMP冻干品供货 不提供 不提供 不提供 A3831-56变色冻干球(dNTP) A3861-22基础冻干瓶(全dUTP)
A3861-23荧光冻干瓶(全dUTP)
A3861-24基础冻干球(含UDG酶)
A3861-25荧光冻干球(含UDG酶)

性能展示
1、dNTP和dUTP使用速度比较
Bst 2.0与Bst dU5.0在使用100%dUTP核苷酸底物时，LAMP扩增低丰度模板的情况比较。结果显示：Bst dU5.0在使用100%dUTP时，表现出与dNTP一致的扩增速度。而Bst2.0在使用全dUTP时，出现不同程度的扩增滞后（可能与扩增区域GC含量有关）。
热启动Bst dU5.0使用dUTP的能力
2、UDG对Bst dU5.0聚合酶的100%dU 扩增产物的消化能力测试
泳道1:dNTP扩增产物，无UDG消化;泳道2:dNTP扩增产物，20U的UDG消化;泳道3:100%dUTP扩增产物，无UDG消化;泳道4:100%dUTP扩增产物，20U的UDG消化。结果显示：高分子量的dU-LAMP产物均被UDG酶有效的切割。在后续的扩增中，该产物不能再被扩增，从而有效的避免气溶胶污染。
Bst dU5.0 DNA聚合酶
3、Bst dU5.0 DNA聚合酶荧光LAMP抗污染能力测试
在20μl的LAMP反应体系中加入污染物，即造成远高于检测模板的扩增（蓝线和红线），由图可见20cps-污染物（蓝线）快于1000cps-RNA(绿线)的检测。在反应体系中加入终浓度10mU/ul的热敏UDG后，污染物引起的假阳性消除(黑线和橙线)。结果表明:采用100%dU作为底物进行LAMP扩增，并联合热敏UDG可有效减少LAMP假阳性扩增。值得注意的是，在HaiGene的其它测试中加入20%的dTTP后，假阳性扩增并不能有效消除。这表明在LAMP扩曾中，为防止假阳性扩增，采用100%dUTP作为底物的必要性，HaiGene确保Bst dU5.0系列试剂为100%dU底物。因此建议实验室始终采用dUTP为底物进行LAMP扩增，一旦发生污染，可通过加入热敏UDG进行消除。而采用dNTP扩增导致气溶胶污染后，整个实验室将面临数周以上的停摆风险。
LAMP探针扩增
4、以Bst dU5.0 Basic试剂搭配 OG 橙绿变色反应管（A3828-21）
以2019-nCoV体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copy，NTC为ddH2O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为70℃反应30min后。
LAMP橙绿扩增

应用LAMP产品文献
1. Rapid Visual Detection of Elite Erect Panicle Dense and Erect Panicle 1 Allele for Marker-Assisted Improvement in Rice (Oryza sativa L.) Using the Loop-Mediated Isothermal Amplification Method. Curr Issues Mol Biol. 2024 Jan 4;46(1):498–512.
2. Rapid Visual Detection of High Nitrogen-Use Efficiency Gene OsGRF4 in Rice (Oryza sativa L.) Using Loop-Mediated Isothermal Amplification Method. Genes (Basel). 2023 Sep 23;14(10):1850.
3. Rapid and visual identification of HIV-1 using reverse transcription loop-mediated isothermal amplification integrated with a gold nanoparticle-based lateral flow assay platform. Front Microbiol. 2023 Jul 12;14:1230533.
4. Rapid Detection of Streptococcus mutans Using an Integrated Microfluidic System with Loop-Mediated Isothermal Amplification. J Microbiol Biotechnol. 2023 May 19;33(8):1101–1110.
5. Rapid point-of-care detection of BK virus in urine by an HFman probe-based loop-mediated isothermal amplification assay and a finger-driven microfluidic chip.PeerJ. 2023 Mar 8;11:e14943.
6. Rapid detection of monkeypox virus and monkey B virus by a multiplex loop-mediated isothermal amplification assay. J Infect. 2023 Feb 13;86(4):e114–e116.
7. SMART: A Swing-Assisted Multiplexed Analyzer for Point-of-Care Respiratory Tract Infection Testing. Biosensors (Basel). 2023 Feb 4;13(2):228.
8. An HFman Probe-Based Multiplex Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay for Simultaneous Detection of Hantaan and Seoul Viruses. Diagnostics (Basel). 2022 Aug 10;12(8):1925.
9. Real-Time Detection of LAMP Products of African Swine Fever Virus Using Fluorescence and Surface Plasmon Resonance Method. Biosensors (Basel). 2022 Apr 3;12(4):213.
10.Multiplex, Real-Time, Point-of-care RT-LAMP for SARS-CoV-2 Detection Using the HFman Probe.ACS Sens. 2022 Feb 22;7(3):730–739.
11.Deep‐dLAMP: Deep Learning‐Enabled Polydisperse Emulsion‐Based Digital Loop‐Mediated Isothermal Amplification. Adv Sci (Weinh). 2022 Jan 24;9(9):2105450.
12.Development of a TaqMan loop-mediated isothermal amplification assay for the rapid detection of pigeon paramyxovirus type 1. Arch Virol. 2021 Mar 23;166(6):1599–1605.
13.Rapid, visual, label-based biosensor platform for identification of hepatitis C virus in clinical applications. BMC Microbiol. 2024 Feb 28;24:68.
14.A novel extraction-free dual HiFi-LAMP assay for detection of methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus.Microbiol Spectr. 2024 Feb 20;12(4):e04133-23.
15.A duplex HiFi-LAMP assay for screening of two novel human circoviruses HCirV-1 and HCirV-2. BMC Infect Dis. 2024 Dec 5;24:1388.
16.Point-of-care test of blood Plasmodium RNA within a Pasteur pipette using a novel isothermal amplification without nucleic acid purification. Infect Dis Poverty. 2024 Oct 31;13:80.
17.Rapid detection of human influenza A viruses by HFman probe-based loop-mediated isothermal amplification assays. Heliyon. 2023 Oct 25;9(11):e21591.