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pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C1801M pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒 1 kit 4000
本试剂盒所包含的原核表达载体 pCold-SUMO 是在pCold 载体基础上改造而成(HaiGene 专利),该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌,在低温下(15 度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢,使得蛋白合成速度减慢,从 而最大限度的提高了蛋白正确折叠的几率,提高了蛋白可溶性表达,增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的SUMO tag可以极大地提高小分子量蛋白的表达量,而且进一步提高了蛋白的可溶表达几率。同时,TEE 信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。
BL21(DE3)Chaprone E.coli 细菌中含有分子伴侣蛋白质粒,其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性蛋白。 分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性(chloramphenicol,Cmr)的表达受控于四环素(tetR)操纵子。
本试剂盒配备的rTEV 蛋白酶可以识别SUMO 标签后面的Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly 氨基酸序列,并在识别位点 Gln-Gly 之间进行切割,从而去除SUMO标签。
pcold-sumo 载体图谱
组分
组分名称 数量 保存
pCold-SUMO-M Vector (100 ng/μl) 50 μl -20℃
rTEV Protease (10 U/μl) 100 μl
20×rTEV Buffer 1ml
0.1M DTT 100 μl
RTS BL21(DE3)Chaprone感受态细胞 50 μl*8
E.coli Transfer Reagent 0.6 ml
pCold-SUMO Primer-F 100 μl
pCold-SUMO Primer-R 100 μl
主要特征
  • 冷启动子,低温诱导表达,最大限度地提高蛋白地可溶性
  • 分子伴侣可协助蛋白的正确折叠
  • 可大大的提高蛋白表达量
  • 应用
    包涵体蛋白的最佳解决方法,提高蛋白的可溶性优化表达。
    实例
    pcold-sumo载体提高蛋白的可溶性表达 Fig . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未诱导
    2. pET15b系统表达全菌体蛋白
    3.pET15b系统表达上清液(可溶蛋白部分)
    4.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)全菌体蛋白
    5.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分)
    6.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone全菌体蛋白
    7.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分)
    8.使用Ni-NTA Resin纯化SUMO融合蛋白
    9.切除SUMO tag后的目的蛋白
    泳道2和3表明使用pET系统表达几乎无可溶性蛋白表达,皆为包涵体;泳道4和5表明使用pCold-SUMO系统于BL21(DE3)菌中,可溶性蛋白表达约占40%;泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可进一步提高蛋白的可溶性表达。
     
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