连接酶
腺苷化T4 RNA连接酶2（截短型）
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T4 RNA连接酶2 (T4 RNA Ligase2-truncated)，能特异性将5’末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3’ OH末端。反应无需ATP，但需预腺苷化接头。与T4 RNA Ligase2野生型不同，该酶不能连接5’端磷酸化底物。 该酶为截短型的双点突变体，包含K227和R55的双突变，降低了赖氨酰腺苷化，并提高了酶的连接活性。连接反应的背景被降为最低是因为：不再使用ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶可用于二代测序small RNA 的文库构建。 |
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单位定义 |
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| 200单位指在标准反应体系，25℃反应条件下，1h能将50%的31-merRNA连接到10pmol的预腺苷化的17-merDNA末端所需的酶量。 | |||||||||||||
储存 |
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| -20℃可保存3年,避免反复冻融。 | |||||||||||||
使用注意事项 |
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（1）1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时不需要ATP。 （2）最佳反应温度25℃，65℃ 20min可使该酶失活。 （3）该酶的连接接头需要5’-预腺苷化。不能连接磷酸化底物。 （4）该酶不能连接双链DNA或RNA。 （5）加入终浓度15% PEG 8000可提高连接效率。 |
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功能测试（该实验结果来自HaiGene实验室，未经允许，不得转载） |
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