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热启动Bst 3.2/4.2 LAMP扩增试剂--Buckets Stop Here!

——————热启动、低引物用量、全系70℃扩增、速度快、高特异性
eLAMP引物设计
产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3831-07 HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase(无甘油) 1600U 750
16KU 4,500
A3831-00 HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase(无甘油) 1600U 850
16KU 5,000
A3831-01 HotStart Bst 4.2 Basic Mix(预冻干液体) 200T(25 μl体系) 2,250
A3831-11 HotStart Bst 4.2 Basic & SYBR Green Mix 200T(25 μl体系) 2,250
A3831-03 HotStart Bst 4.2 Basic Bead(基础冻干球) 100T(25 μl体系) 1,750
A3831-05 HotStart Bst 4.2 Red Bead(红黄变色冻干球) 100T(25 μl体系) 1,750
A3831-06 HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead(紫绿变色冻干球) 100T(25 μl体系) 1,750
冻干球的订制服务:单球反应体积20-100μl 
用于Bst4.2 LAMP扩增的其它辅助品
A3828-21 OG 橙绿变色管 96T(25 μl体系) 750  
A3831-21 LAMP Loop DP-Probe (订制品) 800T(25 μl体系) 1,500
LP1002 COVID 19-ORF1ab LAMP Primer Set
(扩增特异性高、速度快、灵敏度高的引物组)
50T(25μl体系) 500
HaiGene扎根于分子生物学工具酶领域,作为国内最早进入LAMP恒温扩增领域的工具酶供应商之一,HaiGene不断强化在分子酶进化平台(in silico Design & invitro Evolution Workflow)的技术优势。在近10年的时间里,持续聚焦于LAMP恒温扩增技术,HaiGene开发出具有全球顶级品质的LAMP扩增用酶-Bst聚合酶系列。相信HaiGene在该领域的技术进步将极大的推动下游科研、食品、环境、健康等领域的应用拓展。HaiGene全面丰富的产品线,确保满足的下游各项灵活多样的需求。
  第三代Bst 酶 第二代Bst 酶 第一代Bst 酶
  Bst 4.2  Bst 3.2  Bst 4.0  Bst 3.0 Bst 2.0 Bst
热启动 Aptamer封闭 Aptamer封闭        
反应温度 70℃ 70℃ 65℃ 65℃ 65℃ 60℃
扩增引物 4-6条 4-6条 6条 6条 6条 6条
F3/B3  不需要 不需要 需要 需要 需要 需要
检测底物 DNA/RNA DNA DNA/RNA DNA/RNA DNA DNA
酶特性 特异性最佳 多用途扩增 野生

性能展示

1、Bst 4.2 HotStart功能展示
采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性。
热启动LAMP
 
2、以Bst 4.2 SYBR Green试剂进行标准LAMP和eLAMP扩增比较
以human Total RNA为模板,采用RnaseP LAMP Primer进行标准LAMP和eLAMP 扩增。在25ul扩增体系中加入10ng、1ng和0ng的RNA,70℃反应40min。从扩增结果可获得,在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除,对扩增速度几乎无影响,并且非特异性扩增得到改善。 6 Primer LAMP引物浓度:FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM。 4 Primer eLAMP引物浓度:FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM。
 
热启动荧光法LAMP
 
3、以Bst 4.2 Basic试剂进行DP-eLAMP探针法扩增
在众多的探针法LAMP测试中,DP-LAMP探针法(Displaceable Probe LAMP)为HaiGene推荐的使用方法(参考PMID: 33626039)。在LAMP扩增中将LF或LB引物退火至互补的猝灭oligo,利用链置换活性获得游离的荧光信号(可参考HaiGene A3831-21说明书资料)。该方案可进一步降低LAMP的非特异扩增。下图为DP-eLAMP进行三种荧光标记探针的实验数据。结果显示HotStart Bst4.2总能获得高特异性和高重复性的扩增。
 
热启动探针法LAMP
 
4、以Bst4.2 L-HNB 试剂进行L-HNB (紫罗兰-淡绿) 变色反应(肉眼观察)
以2019-nCoV体外转录RNA为模板,采用eLAMP扩增法(FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM), 对10000、1000、100、25copies/管的阳性RNA进行检测,ddH20为阴性对照(4重复)。下图为70℃反应30min 后的检测结果。结果表明L-HNB法获得清晰易于区分的颜色变化,极易区分阳性和阴性扩增。
 
热启动LAMP 紫绿变色
 
5、 以Bst4.2 L-HNB (紫罗兰-淡绿) 变色反应对反应缓冲盐Tris的耐受性测试
以2019-nCoV体外转录RNA为模板,采用eLAMP扩增法(FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM), 对1000copies/管的阳性RNA进行检测(2重复),ddH20为阴性对照(2重复)。下图为70℃反应30min 后的检测结果。结果表明L-HNB法,在1x浓度下可耐受10mM Tris-HCl的缓冲盐,阳性样本仍然可以充分的变色。该变色方法不受样本中缓冲盐影响。
 
热启动LAMP 紫绿变色
 
6、 以Bst4.2 Red试剂进行LAMP红黄变色扩增
以2019-nCoV体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。上图为加样结束反应起始前,下图为70℃反应30min后。
 
热启动LAMP 红黄变色
 
7、 以Bst 4.2 Basic试剂搭配 OG 橙绿变色反应管(A3828-21)
以2019-nCoV体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。上图为加样结束反应起始前,下图为70℃反应30min后。
热启动LAMP 橙绿变色