DNA/RNA 恒温扩增试剂|新海基因检测有限公司

DNA/RNA 恒温扩增试剂

产品编号	产品名称	规格	价格(元)	说明书
A3831	热启动Bst 3.2/4.2 LAMP扩增试剂新品！
A3824-02	Bst 4.0 Basic Mix (有升级品，A3831-01)	100T(20μl体系)	1,650
A3828-02	Bst 4.0 Basic Bead (有升级品，A3831-03)	100T(25μl体系)	2,450
A3824-05A	Bst 4.0 Basic Mix(with UDG)	100T(25ul体系)	2,450
A3824-05B	Bst 4.0 Basic Mix(with UDG)	2000T(25μl体系)	32,500

A3824-03	Bst 4.0 SYBR Green Mix (有升级品，A3831-02)	100T(20μl体系)	1,650
A3828-03	Bst 4.0 SYBR Green Bead (有升级品，A3831-04)	100T(25μl体系)	2,450

A3824-01	Bst 4.0 LowSalt Mix (有升级品，A3831-05)	100T(25μl体系)	1,650
A3828-01	Bst 4.0 LowSalt Bead (有升级品，A3831-05)	100T(25μl体系)	2,450
A3824-01R	Bst 4.0 LowSalt Red LyoMix (有升级品，A3831-05)	100T(25μl体系)	1,750
A3828-01R	Bst 4.0 LowSalt Red Bead (有升级品，A3831-05)	100T(25μl体系)	2,450

A3824-04	Bst 4.0 HNB LyoMix (有升级品，A3831-06)	100T(25μl体系)	1,750
A3828-04	Bst 4.0 HNB Bead (有升级品，A3831-06)	100T(25μl体系)	2,450
特别说明	（1）鉴于特殊的产品工艺，HaiGene恒温扩增Mix及冻干品，全系列均不能进行浊度分析，需要浊度分析的实验，请选用单酶系列进行实验。任何其它来信咨询均不再做说明与回复。（2）大规格采购（>1万次）冻干微球及相应制品,询价！（3）订制生产特殊冻干品，询价！
可用于恒温扩增可视化检测的辅助化学品试剂
A3828-21	OG 橙绿变色管（用于橙绿变色）	96支(25μl体系)	750
A3828-23	10x红色pH指示染料（可用于红黄变色）	500T(25μl体系)	询价
HaiGene开发的扩增特异性高、速度快、灵敏度高的引物组，可用于性能比对和对照测试
LP1002	COVID 19-ORF1ab LAMP Primer Set (扩增特异性高、速度快、灵敏度高的引物组)	50T(25μl体系)	500

在核酸分子的恒温扩增过程中，无论采用LAMP、CPA等扩增技术，这种高速度的扩增特性，均不可避免的引起假阳性扩增。这种假阳性的扩增情况在LAMP扩增中表现尤为明显，由于LAMP扩增用到很高浓度的引物，因此难免保证有少量错配和引物Dimer，这些轻微的污染都会导致在LAMP高速扩增中造成假阳性。HaiGene优化的反应缓冲液，配合独有的显色技术和阴性控制技术建立的预混恒温mix系列产品，可高灵敏度、高特异性的用于LAMP pH变色、橙绿（OG）变色、HNB变色、SYBR Green荧光检测。在LAMP扩增实验中，与其它公司提供的LAMP Mix相比，得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能，HaiGene的 Bst 4.0 Mix具有更快的扩增速度和杂质耐受性。

Bst 4.0 MasterMix及冻干微球系列特点

	SYBR Green	HNB变色	基于pH指示变色	橙绿变色
检测方法	定量PCR或恒温荧光仪	裸眼观察	裸眼观察	裸眼观察
显色染料	SYBR Green	HNB染料	pH指示染料	OG染料
阳性判读方式	扩增曲线	天蓝色为阳性	黄色为阳性	绿色为阳性
反应时间	15-25min	20-35min	20-30min	15-25min
灵敏度（copies/test）	5-25 copies	5-50 copies	5-50 copies	5-50 copies
抗杂质能力	强	强	对样本ph敏感	强
缓冲盐耐受性	强	强	非常低	强

恒温扩增使用策略及实例展示

1、Bst 4.0 Basic试剂
液体预混Bst 4.0 Basic Mix( A3824-02)和冻干球Bst 4.0 Basic Lyo Bead( A3828-02)试剂不包含任何显色染料，可自行搭配相关染料或检测手段进行LAMP反应，包括搭配OG染料管进行橙绿变色、搭配标记Oligo进行试纸条检测、搭配荧光染料进行荧光检测、搭配Molecular Beacon探针进行荧光检测等方法。
应用实例1：在以A3824-02或 A3828-02搭配OG变色管（ A3828-21）条件下，用 LP1002引物组进行COVID-19的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性极佳。以2019-nCoV体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH₂O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

2、Bst 4.0 Basic with UDG防污染试剂
LAMP是一种高速、高产核酸扩增法，通常会将目标产物放大10e10~12倍，微量的液体泄露和蒸发都可导致实验室污染，引起假阳性扩增。得益于HaiGene Bst4.0 DNA/RNA Pol识别dUTP底物的能力，使得防污染体系得以建立，并且维持了标准LAMP的扩增速度和灵敏度。HaiGene防污染恒温扩增试剂，在单管25 μl体系下，可以有效的去除十万copies（10e5）的污染物。本试剂可应用于荧光、核酸试纸条等核酸检测方法。
应用实例2：以A3824-05为材料，加入荧光染料SYBR Green后，可用于荧光LAMP的检测。用 LP1004引物组进行COVID-19的污染物的LAMP测试，在采用防污染试剂后，10e5 copies污染模板无法检出。

应用实例3：以A3824-05为材料，搭配核酸胶体金试纸条，用 LP1002修饰引物组（适用于核酸试纸条，HaiGene专有特异性控制技术）进行COVID-19的LAMP测试。以2019-nCoV体外转录RNA为模板，分别为10（阳性结果）、100（阳性结果）、1000 copies（阳性结果），NTC-ddH₂O（阴性结果），10e5copies的dUTP污染物（阴性结果），65℃反应25min后点入试纸条。

3、Bst 4.0 SYBR Green试剂
应用实例4：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行COVID-19的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以2019-nCoV体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH₂O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

4、Bst 4.0 LowSalt试剂
Bst 4.0 LowSalt试剂系列，包含极低浓度的缓冲盐。由于LAMP扩增中产生大量的H+导致反应完毕后的溶液pH由8.6-8.8下降到<7.2，因此可通过添加pH指示染料来进行样本的阳性扩增。 A3824-01和 A3828-01试剂中不含有任何染料，可用于自行添加染料，或用于其它pH检测系统的试剂开发。在搭配红色pH指示染料（A3828-23）的情况下，可进行红黄变色。
应用实例5：在以A3824-01或 A3828-01搭配红色pH指示染料（A3828-22）条件下， LAMP红黄变色反应用 LP1002引物组进行COVID-19的LAMP测试。以2019-nCoV体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6 Copies，NTC为ddH₂O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为65℃反应30min 后。

5、Bst 4.0 HNB试剂
Bst 4.0 HNB试剂中包含了HNB染料，在LAMP扩增起始前HNB染料与Mg²⁺结合表现出肉眼可见的紫罗兰色，当阳性扩增发生时Mg²⁺被LAMP反应的副产物焦磷酸螯合，HNB染料无法与Mg²⁺结合表现出肉眼可见的天蓝色。由此判断天蓝色为阳性扩增。该显色方法受样本缓冲盐、pH等影响较小，适用的样本较pH显色法通用性更强。
应用实例6：在以A3824-04或 A3828-04，用 LP1002引物组进行COVID-19的LAMP测试。以2019-nCoV体外转录RNA为模板，分别为1000、100、10Copies/管（3重复）和NTC（3重复）。下图为65℃反应30min后检测结果。

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