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mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix(HaiGene创新性工具酶)

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3206A 热启动mTTx DNA/RNA 聚合酶 (5U/ul) 250U 1,750
A2261A mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix 1 ml 750
A2261B 25 ml 10,000
RD2262 RNA TaqMan荧光PCR核酸检测试剂盒开发服务 询价  
TTx DNA聚合酶源于Tth DNA聚合酶,而逆转录活性较Tth DNA聚合酶大幅提高,在优化的反应Buffer中,TTx表现出卓越的RT-PCR特性,但TTx DNA Polymerase的活性仍然依赖于对PCR有抑制活性的Mn2+,这种专用的反应Buffer系统限制了TTx应用的拓展性。mTTx DNA/RNA聚合酶经电子重构架技术,改变了TTx的活性配体中心,使其在Mg2+条件下仍然具有极强的逆转录活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg2+条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差,这种独有的特性使得mTTx不再受限于反应Buffer系统,增加了其应用的拓展性,使得多种类型的实验得以实现,包括:采用单酶进行TaqMan RT-PCR、在单管相同的Buffer系统中对RNA和DNA进行多重检测、超多重的RNA模板扩增、RNA的NGS建库、高保真RT-PCR扩增等。

主要特征

  • 依赖于DNA模板的聚合酶活性;
  • 5'-3'外切酶活性,用于TaqMan探针切割;
  • 金属配体离子为Mg2+通常使用浓度2-3.5mM;
  • 可以有效的使用dUTP,建立防污染体系;
  • 相比于TTx DNA聚合酶,mTTx的耐热性能有所下降,92℃条件下的半衰期为30min;
  • 热启动版本的mTTx在50℃条件下100%无活性,92℃加热5min后恢复活性。

单位定义

一个活力单位即在在68°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年,避免反复冻融。

使用方法(以mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix为例)

1. 按以下组分配制RT-qPCR反应液
2×mTTx MasterMix                                             10 μl
上游引物(10 μM)                                             0.4 μl
下游引物(10 μM)                                             0.4 μl
荧光探针(10 μM)                                             0.2 μl
RNA                                                                        X μl
ddH2O                                                        Up to 20 μl
注意:引物和探针的使用浓度可在0.1-0.8ul直接调整。
2. Direct One-Step RT-PCR程序
92℃      5 min (热启动)
60℃      5 min (逆转录)
92℃     10 s 
60℃      30 s(收集信号)  循环35-45次
注意:mTTx的最佳变性温度为92℃,其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在58-70℃调整。

实例展示

1. 以2019新冠病毒N基因体外转录RNA直接作为模板,应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标RNA进行TaqMan qPCR扩增,结果表明不同拷贝数的RNA,扩增性能良好。
直接一步法RT-qPCR
2. 应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标DNA和RNA进行TaqMan qPCR扩增,结果表明该产品对DNA模板和RNA模板扩增几乎无偏差,RNA模板比DNA模板更容易检出。
直接一步法RT-qPCR
3.将不同数量的Jurkat细胞直接加入到TaqMan PCR反应体系中,应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix进行内参基因GAPDH的TaqMan qPCR扩增。
直接一步法RT-qPCR