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南极热敏UDG

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C5029A 南极热敏UDG (2 U/µl) 200U 600
C5029B 南极热敏UDG(20 U/µl)(高浓度) 1000U 2,500
热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(ThermoLabile Uracil DNA Glycosylase, ThermoLabile UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白,又称南极热敏UDG。该热敏UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶,产生的缺嘧啶位点,在高温或高 pH 下,极易水解断裂。该热敏UDG酶对RNA无活性,主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热,经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性,导致含有dU碱基的PCR产物的降解。而来源于嗜冷海洋细菌的热敏UDG在50℃ 5min即完全失活,在进行PCR扩增前,在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性),25℃ 2min即可消除PCR产物的残留污染,由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性)在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活,因此不会影响新的含dU的PCR产物。

应用

  • 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基
  • 去除 PCR 残存污染

活性定义

在标准反应体系下,37°C每分钟催化60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链DNA上释放所需要的酶量为一个活性单位。

反应buffer

ThermoLabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

储存

-20℃可保存2年。

热失活

50℃,5min。

功能性测试(该数据来自HaiGene实验室,未经允许不得转载!)

热敏UDG酶

在防污染PCR中的应用实例

为评估热敏UDG对残留模板去除的能力,我们首先使用含dUTP的RAPA3G Probe qPCR MasterMix扩增三种基因产物(GAPDH,EHP,Covid-19 N Gene),然后以105拷贝的含U产物作为模板,分别加入PCR终5mU/µl、12.5mU/µl、25mU/µl、50mU/µl的热敏UDG(C5029)进行qPCR。25℃孵育2min使UDG发挥活性,降解含U产物,以降低其产生假阳性信号的机会;统计三组加热敏UDG和不加UDG组反应的Ct值(如下表),得到△Ct,△Ct值越大说明去除残留产物的效率越高。本实验说明:5mU/µl的该热敏UDG即可很好的降解含U产物(如下图),即具有良好的去除残留模板的能力。