客户服务热线
400-0470-600

微信
13903605303

欢迎来到新海基因官网~ 收藏本站 | 订单下载 | 联系我们
当前位置: 首页 >核酸酶专题 >核酸内切酶>南极热敏UDG

产品中心

订购须知

邮箱:order@haigene.cn
电话:400-0470-600
传真:0451-58864810
订购:订单下载
QQ : 876341716

南极热敏UDG

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C5029A 南极热敏UDG 100U 600
C5029B 500U 2,500
热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白,又称南极热敏UDG。该热敏UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶,产生的缺嘧啶位点,在高温或高 pH 下,极易水解断裂。该酶对RNA无活性,主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热,经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性,导致含有dU碱基的PCR产物的降解。而来源于嗜冷海洋细菌的热敏UDG在50℃ 5min即完全失活,在进行PCR扩增前,在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性),25℃10min即可消除PCR产物的残留污染,由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性)在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活,因此不会影响新的含dU的PCR产物。

组分

组分名称 数量
Heatlabile Uracil DNA Glycosylase(1 U/μl) 100 μl/500 μl

应用

  • 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基
  • 去除 PCR 残存污染

活性定义

在标准反应体系下,37°C每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量为一个活性单位。

反应buffer

Heatlabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

储存

-20℃可保存2年,避免反复冻融。

热失活

50℃,10min。

实例

为评估热敏UDG对残留模板去除的能力,我们首先使用含dUTP的RAPA3G Probe qPCR MasterMix扩增三种基因产物(GAPDH,EHP,Covid-19 N Gene),然后以105拷贝的含U产物作为模板,分别加入0.1U/reaction、0.25U/reaction、0.5U/reaction和1U/reaction 的热敏UDG(C5029)进行qPCR,程序如下:
25℃      2min,
95℃      5min
95℃      5s
60℃      30s     45cycles
25℃孵育2min使UDG发挥活性,降解含U产物,以降低其产生假阳性信号的机会;统计三组加热敏UDG和不加UDG组反应的Ct值(如下表),得到△Ct,△Ct值越大说明去除残留产物的效率越高。本实验说明:0.1U/反应的该热敏UDG即可很好的降解含U产物(如下图),即具有良好的去除残留模板的能力。
热敏 UDG(C5029) GAPDH Ave.Ct EHP Ave.Ct Covid-19 N Gene Ave.Ct
0 19.5 19.6 21.3
0.1 U/reaction 34.8 36.8 37.9
0.25U/reaction 37.3 39.9 38.2
0.5 U/reaction 35 36.9 38.9
1 U/reaction 36.6 39.5 39.3
热敏UDG