产品编号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
说明书 |
C5029A |
南极热敏UDG |
100U |
600 |
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C5029B |
500U |
2,500 |
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热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白,又称南极热敏UDG。该热敏UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶,产生的缺嘧啶位点,在高温或高 pH 下,极易水解断裂。该酶对RNA无活性,主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热,经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性,导致含有dU碱基的PCR产物的降解。而来源于嗜冷海洋细菌的热敏UDG在50℃ 5min即完全失活,在进行PCR扩增前,在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性),25℃10min即可消除PCR产物的残留污染,由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性)在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活,因此不会影响新的含dU的PCR产物。 |
组分
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组分名称 |
数量 |
Heatlabile Uracil DNA Glycosylase(1 U/μl) |
100 μl/500 μl |
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应用
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- 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基
- 去除 PCR 残存污染
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活性定义
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在标准反应体系下,37°C每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量为一个活性单位。 |
反应buffer
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Heatlabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。 |
酶保存液
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20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。 |
储存
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-20℃可保存2年,避免反复冻融。 |
热失活
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50℃,10min。 |
实例
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为评估热敏UDG对残留模板去除的能力,我们首先使用含dUTP的RAPA3G Probe qPCR MasterMix扩增三种基因产物(GAPDH,EHP,Covid-19 N Gene),然后以105拷贝的含U产物作为模板,分别加入0.1U/reaction、0.25U/reaction、0.5U/reaction和1U/reaction 的热敏UDG(C5029)进行qPCR,程序如下:
25℃ 2min,
95℃ 5min
95℃ 5s
60℃ 30s 45cycles
25℃孵育2min使UDG发挥活性,降解含U产物,以降低其产生假阳性信号的机会;统计三组加热敏UDG和不加UDG组反应的Ct值(如下表),得到△Ct,△Ct值越大说明去除残留产物的效率越高。本实验说明:0.1U/反应的该热敏UDG即可很好的降解含U产物(如下图),即具有良好的去除残留模板的能力。 |
热敏 UDG(C5029) |
GAPDH Ave.Ct |
EHP Ave.Ct |
Covid-19 N Gene Ave.Ct |
0 |
19.5 |
19.6 |
21.3 |
0.1 U/reaction |
34.8 |
36.8 |
37.9 |
0.25U/reaction |
37.3 |
39.9 |
38.2 |
0.5 U/reaction |
35 |
36.9 |
38.9 |
1 U/reaction |
36.6 |
39.5 |
39.3 |
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