南极热敏UDG|新海基因检测有限公司

南极热敏UDG

产品编号	产品名称	规格	价格(元)	说明书
C5029A	南极热敏UDG	100U	600
C5029B	南极热敏UDG	500U	2,500

热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白，又称南极热敏UDG。该热敏UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，产生的缺嘧啶位点，在高温或高 pH 下，极易水解断裂。该酶对RNA无活性，主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热，经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性，导致含有dU碱基的PCR产物的降解。而来源于嗜冷海洋细菌的热敏UDG在50℃ 5min即完全失活，在进行PCR扩增前，在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶（热敏性），25℃10min即可消除PCR产物的残留污染，由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶（热敏性）在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活，因此不会影响新的含dU的PCR产物。

组分

组分名称	数量
Heatlabile Uracil DNA Glycosylase(1 U/μl)	100 μl/500 μl

应用

去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基
去除 PCR 残存污染

活性定义

在标准反应体系下，37°C每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量为一个活性单位。

反应buffer

Heatlabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

储存

-20℃可保存2年，避免反复冻融。

热失活

50℃，10min。

实例

为评估热敏UDG对残留模板去除的能力，我们首先使用含dUTP的RAPA3G Probe qPCR MasterMix扩增三种基因产物（GAPDH,EHP,Covid-19 N Gene），然后以10⁵拷贝的含U产物作为模板，分别加入0.1U/reaction、0.25U/reaction、0.5U/reaction和1U/reaction 的热敏UDG(C5029)进行qPCR，程序如下：
25℃      2min,
95℃ 5min
95℃      5s
60℃      30s 45cycles
25℃孵育2min使UDG发挥活性，降解含U产物，以降低其产生假阳性信号的机会；统计三组加热敏UDG和不加UDG组反应的Ct值（如下表），得到△Ct，△Ct值越大说明去除残留产物的效率越高。本实验说明：0.1U/反应的该热敏UDG即可很好的降解含U产物（如下图），即具有良好的去除残留模板的能力。

热敏 UDG（C5029）	GAPDH Ave.Ct	EHP Ave.Ct	Covid-19 N Gene Ave.Ct
0	19.5	19.6	21.3
0.1 U/reaction	34.8	36.8	37.9
0.25U/reaction	37.3	39.9	38.2
0.5 U/reaction	35	36.9	38.9
1 U/reaction	36.6	39.5	39.3

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组分

应用

活性定义

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酶保存液

储存

热失活

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