产品编号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
说明书 |
A3208-02 |
5xG5U HiFi PCR Mix (with Blue Dye) |
40Tx50µl |
450 |
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400Tx50µl |
3,500 |
A3208-00 |
G5U HiFi DNA Polymerase |
200U |
500 |
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1000U |
2,000 |
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G5U HiFi DNA Polymerase(G5U高保真聚合酶), 由HaiGene分子酶进化平台(in silico Design & invitro Evolution Workflow)筛选获得,其融合Q5和Q5U的性能于一身,使其成为一酶多用的全能选手。该酶来源于高保真DNA聚合酶,并加入了增强的延伸结构,使其具有长片段扩增、高产能力。强压力筛选的外切活性区域(280xTaq酶保真度),使其具有超保真性能(与Q5同水平)。底物活性中心的改造,使其具有dUTP渗入的能力、扩增含有尿嘧啶模板的能力。使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。该酶具有2kb/min以上的延伸速度。该酶具有5’-3’的聚合酶活性、强3’-5’的外切酶活性,产物为平末端。
许多有高保真功能的聚合酶来为 B型 DNA 聚合酶,在遇到 DNA 模板中的尿嘧啶碱基时停止复制。 G5U高保真聚合酶删除了尿嘧啶结合域,使其能够读取和扩增含有尿嘧啶的模板,该性能赋予其独特的“U” 特征。该特征有两个重要的应用方向:(1)用于超保真扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、或受损DNA;(2)在超保真扩增中搭配dUTP和热敏UDG,用于防止PCR体系中携带污染。除此外,也多用于USER 克隆。
5xG5U HiFi PCR Mix包含蓝色电泳指示染料,并且采用了Mg2+封闭的热启动方式,以获得最高特异性的扩增。当Blocker加入到反应体系时,Blocker与Mg2+形成不溶沉淀物,聚合酶活性被完全阻断,在95℃加热2min后,Activator水解掉Blocker,Mg2+得以释放,从而启动扩增反应。
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主要特征
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- 超保真扩增:与Q5 DNA聚合酶同水平的保真性能(280xTaq酶保真度)。
- 识别dUTP底物:能够读取和扩增含有尿嘧啶的模板,具有“U” 特征。
- 防污染扩增:在PCR扩增中可以使用dUTP完全替代dTTP,建立防污染高保真扩增。
- 长片段扩增:质粒、λDNA 等简单模板>20 kb,复杂基因组模板>8 kb。
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单位定义
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一个活力单位即在72°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。 |
储存
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(1)酶储存液:10mM Tris-HCl,pH7.6,100mM NaCl,0.05% Tween20, 1mM DTT,0.5mM EDTA,50%甘油。
(2)置于-20°C以下,可保存3年。 |
功能性测试(该数据来自HaiGene实验室,未经允许不得转载!)
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1.不同长度片段的扩增图(最高到20kb) |
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Fig1:使用G5U HiFi DNA Polymerase以gDNA为模板进行扩增500bp-8kb的产物,以λDNA为模板扩增15-20kb的产物。酶的使用浓度为:0.02-0.04U/μl。 |
2.不同酶量的扩增性能 |
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Fig2:以λDNA为模板(40pg/μl)分别使用不同量的G5U扩增1kb的片段,如图所示在0.01U/μl的酶浓度下即可有效扩增。(左图) 以gDNA为模板(2ng/μl)分别使用不同量的G5U扩增5kb的片段,如图所示在0.02U/μl的酶浓度下即可有效扩增。(右图) |
3.模板扩增灵敏度展示 |
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Fig3:使用G5U HiFi DNA Polymerase以不同量的gDNA为模板扩增500bp的产物,如图所示该酶可扩增低至10pg的gDNA(约3-5个细胞),酶工作浓度为0.04U/μl。 |
4.高GC含量模板的扩增 |
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Fig4:使用G5U HiFi DNA Polymerase以人基因组DNA为模板扩增1250bp 的高GC(67%)片段,在1xQ Solution的条件下,可扩增低 至2ng的模板,酶的工作浓度为0.02U/μl。 |
5.扩增dUTP模板性能 |
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Fig5:G重硫酸盐处理DNA后,未发生甲基化的C碱基转化为U碱基,使用G5U HiFi DNA Polymerase用于高保真扩增DNA甲基化实验,扩增产物为500bp,酶的工作浓度为0.04U/μl。 |
6.保真度 |
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Fig6:使用G5U HiFi DNA Polymerase对模板DNA进行35轮PCR扩增后,对PCR进行NGS测序。结果表明G5U与Q5 DNA聚合酶保真度相当。 |