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Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A4801 Bsu DNA Polymerase (Large Fragment) 250U 300
2500U 2,500
Bsu DNA聚合酶是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶,主要应用于RPA重组酶扩增。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列;一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应,Bsu DNA聚合酶启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。
本产品为Bsu DNA 聚合酶大片段,来源于 嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus subtilis),系将Bacillus subtilis DNA 聚合酶(Bsu) I 基因的前296个AA截去而得。该酶保留了Bsu I 的 5´-3´ 聚合酶活性,但是缺失了 5´-3´ 核酸外切酶结构域,该大片段自身缺失 3´-5´ 核酸外切酶活性,可用于重组酶扩增。

组分

组分名称 数量
Bsu DNA Polymerase (Large fragment, 5 U/μl) 50 μl/500 μl
10X Bsu Reaction Buffer 1 ml/1 mlx5

应用

  • 随机引物法标记
  • cDNA 第二条链的合成
  • 单个 dA 的加尾
  • 链置换的 DNA 合成
  • 活性定义

    在37℃条件下,30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。

    性能测试

    按照如下体系配制反应:
    Plasmid DNA                                    100 ng
    10×Bsu Reaction Buffer                        5 μl
    Random9 (100μM)                               2 μl
    dNTP mixture(10 mM)                          2 μl
    Rnase free H2O                           upto 50 μl
    混匀后95℃ 5min,然后冰上放置5min,分别加入不同剂量Bsu DNA聚合酶(泳道1-2:0, 泳道3-4:0.5 μl, 泳道5-6:1 μl,泳道7-8:2 μl,泳道9-10:4 μl,),分别在25℃和37℃孵育3h,电泳检测各组产物如下图
    Bsu dna聚合酶

    1X Bsu Reaction Buffer

    50 mM NaCl ,10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT

    酶储存液

    50 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 20% Glycerol, pH 7.5。

    储存

    -20℃可保存2年,避免反复冻融。

    热失活

    75°C,20min。

    注意事项

    1、由于缺乏3 ´-5 ´核酸外切酶活性,Bsu DNA 聚合酶,大片段不能切除 3´未配对的突出末端,因而不适用于生成平齐末端。
    2、25℃ 时 Bsu DNA 聚合酶,大片段 保留 50% 的活性,是同温度下 Klenow 片段(3´-5´ exo-)的两倍。