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Benzonase核酸酶

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C2001 Benzonase核酸酶 25KU 200 Benzonase核酸酶说明书
100KU 650
10000KU(工业级) 40,000
组织或细胞经RIPA裂解后,大量的基因组DNA从细胞核中释放出来,而且它们不是独立存在的,往往是与核蛋白形成复合体而存在的,这就使得提取物十分粘稠,呈鼻涕状,在提取蛋白的过程中如不能很好的处理这些粘稠的基因组会造成蛋白提取效率的降低及核蛋白的丢失。有人采用机械法,比如超声波处理等,或DNase及RNase消化来减少或消除核酸的影响,但是由于操作的非标准化,往往很难评估核酸清除步骤的有效性和数据稳定性。Benzonase核酸酶与RIPA裂解液等蛋白抽提试剂配合使用,可以很好的消除粗提物中的核酸,降低粘度。
Benzonase核酸酶,是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留和内毒素污染,核酸酶活性达1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时, 也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间,增加了蛋白产量,离心时时沉淀和上清分离的更彻底,更便于溶液的离心(尤其是超滤);提高色谱纯化的效率等。

单位定义

37℃,pH 8.0反应条件下,在30分钟内使△A260 值降低1.0(相当于完全消化37 μg DNA )的酶量定义为一个活性单位。
注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。

应用

  • 蛋白提取时去除核酸污染:在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时,Benzonase核酸酶可有效降低样品粘度,利于下游操作
  • 与细胞或细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白质产量
  • 减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象
  • 降解核酸,利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备
  • 有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率
  • 疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除
  • 超强兼容性

    全能核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。 浓度<0.4%的Triton® X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%-1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。
    条件参数 最适条件 可作用条件范围
    Mg2+ 1-2mM 1-10mM
    pH 8.0–9.2 6–10
    温度 37°C 0–42°C
    DTT 0–100mM >100mM
    β-Mercaptoethanol 0–100mM >100mM
    一价阳离子浓度(如Na+,K+) 0–20mM 0–150mM
    PO43- 0–10 mM 0–100mM

    储存

    置于-20°C,可保存2年。

    实例分析

    Benzonase核酸酶降解基因组DNA Benzonase核酸酶降解基因组DNA
    Fig1.经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品,
    大量基因组DNA释放出来,呈鼻涕状。
    Fig2.离心后,左管为未加Bezonase核酸酶,有鼻涕状
    粘稠物质悬浮在管中,右管为加Bezonase核酸酶,上
    清为透明液体。
    Benzonase核酸酶提高蛋白产量 Benzonase核酸酶提高蛋白产量
    Fig3.离心收集过夜培养的BL21 E.coli菌体,加入大
    肠杆菌蛋白提取液,然后分为三组A.B.C,A组不做任
    何处理,B组超声处理,C组加入Benzonase核酸酶,
    通过BCA法测定蛋白浓度。
    Fig4. 取40mg小鼠的肝脏组织液氮研磨后加入RIPA裂
    解液,然后分为三组A.B.C,A组不做任何处理,B.C组分
    别加入3μl和10μl的Benzonase核酸酶,室温处理10min,
    离心后如图所示。
    benzonase核酸酶增加2D电泳的分辨率 Fig5. A为未加Benzonase处理的,B为加Benzonase处理的
    样品进行二维电泳。如图所示,Benzonase处理的样品可显
    著增加二维电泳的分辨率。

    Benzonase的去除

    在重组蛋白或疫苗、药物等生产过程中应用Benzonase去除核酸后,可通过色谱纯化去除核酸酶,然后可通过检测残留活性或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质,具体的Benzonase去除条件如下表:
    阴离子交换介质 pH 样品和平衡缓冲液 Benzonase核酸酶
    TMAE 7.0 50mM Tris/200mM NaCl not bound
    TMAE 7.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    TMAE 8.0 50mM Tris/250mM NaCl not bound
    TMAE 8.0 >50mM Tris/100mM NaCl not bound
    TMAE 9.0 >50mM Tris/200mM NaCl not bound
    TMAE 9.0 50mM Tris/100mM NaCl not bound
    DEAE 7.0 50mM Tris/200mM NaCl not bound
    DEAE 7.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    DEAE 8.0 50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DEAE 8.0 >50mM Tris/100mM NaCl not bound
    DEAE 9.0 >50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DEAE 9.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    DMAE 8.0 >50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DMAE 8.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    阳离子交换介质 pH 样品和平衡缓冲液 Benzonase核酸酶
    SO3- 6.0 20mM phosphate/100mM NaCl bound
    SO3- 6.0 20mM phosphate/200mM NaCl not bound
    SO3- 5.0 20mM acetate/200mM NaCl bound
    SO3- 5.0 >20mM acetate/700mM NaCl not bound
    SO3- 4.0 >20mM acetate/300mM NaCl bound
    SO3- 4.0 20mM acetate/800mM NaCl not bound
    C00- 6.0 20mM phosphate/0mM NaCl not bound
    C00- 5.0 20mM acetate/40mM NaCl bound
    C00- 5.0 20mM acetate/100mM NaCl not bound
    C00- 4.0 >20mM acetate/150mM NaCl partially bound
    C00- 4.0 20mM acetate/400mM NaCl not bound

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