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3173 DNA Polymerase

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3602A 3173 DNA Polymerase 250U 400
A3602B 2500U 3,000
3173 DNA Polymerase为来源于病毒的热稳定型DNA聚合酶,通过点突变修饰,使其3’-5’外切活性缺失(exo-形式)而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚合酶活性,还具有依赖于RNA的逆转录活性,因此可用于单管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性,可用于DNA或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中,可实现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板,可通过92度加热3s来得到好的扩增效果,而Bst pol在此温度加热后导致扩增活性丧失。
3173 DNA 聚合酶在95°C条件下的半衰期为20min,因此PCR的起始预变性时间通常为1~2min。该酶搭配两种Buffer:10×3173 Isothermal Buffer和5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer用于恒温PCR扩增,其反应温度不能超过70°C。 5×Best PCR Buffer用于常规PCR扩增,94°C预变性时间不可超过5min。

主要特征

  • 同时具有较强的延伸能力和逆转录活性
  • 耐热性能极强,对于复杂模板的扩增活性强
  • 强烈的链置换活性,可应用于LAMP检测
  • 组分

    组分名称 数量
    3173 DNA Polymerase (5 U/μl) 50 μl/500 μl
    10×3173 Isothermal Buffer 1 ml/5 ml
    5×Best PCR Buffer 1 ml/5 ml

    单位定义

    一个活力单位即在65°C条件下,30分钟内催化25nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

    应用

    • 恒温PCR扩增
    • DNA LAMP和RT-LAMP
    • 链置换基因合成
    • 在60-70度之间具有反转录活性,可用于单管RT-PCR

    储存

    -20℃可保存3年。

    使用方法

    1.以DNA为模板进行PCR扩增
    反应体系配制
    3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
    5×Best PCR Buffer                                    10 μl
    dNTP Mixture (2.5 mM each)                        4 μl
    模板DNA                                              1ng~1ug
    上游引物(10 μM)                                       5 μl
    下游引物(10 μM)                                       5 μl
    ddH2O                                              Up to 50 ul
    PCR扩增循环参数 
    循环数温度时间
    1st Cycle90°C2min
    25-40 Cycles90°C15s
    Tm15s
    72°C1kb/1min
    Last Cycle72°C5min
    2.以RNA为模板进行RT-PCR扩增
    反应体系配制
    3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
    5×Best PCR Buffer                                    25 μl
    dNTP Mixture (10 mM each)                        5 μl
    模板RNA                                            10ng~1ug
    上游引物(10 μM)                                     2 μl
    下游引物(10 μM)                                     2 μl
    ddH2O                                           Up to 50 ul
    PCR扩增循环参数 
    循环数温度时间
    1st Cycle60°C60min
    35 Cycles90°C15s
    57°C15s
    72°C1kb/1min
    Last Cycle72°C5min
    3.缺刻恒温PCR扩增
    3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
    10×3173 Isothermal Buffer                           5 μl
    dNTP Mixture (10 mM each)                        5 μl
    模板DNA                                            10ng~1ug
    引物(500 μM)                                           5 μl
    ddH2O                                             Up to 50 μl
    55°C孵育2~8h。